Исследование сурфактанта

Исследование сурфактанта

Гистохимические методы определения сурфактанта основаны на выявлении кислых гликозаминогликанов окраской альциановым синим или коллоидным железом по Хейлу. Для выявления липидных компонентов сурфактанта применяют краситель Судан черный (Б) по Ли-зону. Применение поляризационной микроскопии основано на свойстве двойного лучепреломления фосфолипидов больших альвеолярных клеток (А. А. Биркун и соавт., 1981). Исследование естественной или возбужденной люминесценции в криостатных или замороженных срезах легких, предварительно фиксированных кальций-формолом, позволяет обнаружить люминесценцию альвеолярной выстилки желтовато-зеленого цвета, толщиной 0,5- 1,0 мкм (Т. В. Русова, 1970).

Для непосредственного обнаружения пленки сурфактанта криостатиые срезы окрашивают родамином, растворенным в смеси метанол-хлороформ (1:2), высушивают на воздухе и рассматривают в ультрафиолетовых лучах. Для выделения необходимой области спектра используют фильтры УФС-6, СЗР-7, ЖС-18-0,5. На присутствие сурфактанта в легких указывают светящиеся оранжево-желтые  кольцевидные структуры, возникающие в результате адсорбции сурфактанта на поверхности пузырьков воздуха, которые образуются при оттаивании срезов. Предварительное промывание легких через трахею изотоническим раствором натрия хлорида приводит к значительному ослаблению интенсивности свечения и уменьшению размеров пузырьков вследствие извлечения сурфактанта (Е. Н. Нестеров и соавт., 1973). По данным L. Jozsa, A. Reffy (1975), в фазово-коитрастиом микроскопе при увеличении в 600-1000 раз сурфактант определяется в виде гомогенного слоя, хорошо отграниченного от альвеолярного эпителия.


23.01.2018